اقرأ هذه المقالة
تقنية التألق المناعي ((IF) تقنية التألق المناعي): وهي تقنية مختبرية شائعة، تعتمد على استخدام أجسام مضادة محددة مرتبطة كيميائيًا بأصباغ الفلورسنت، وتستخدم بشكل أساسي في العينات الميكروبيولوجية. للكشف عن العديد من الكائنات الحية الدقيقة مثل البكتيريا والفيروسات والطفيليات والفطريات.
خصائص تكنولوجيا التألق المناعي
تتمتع تقنية التألق المناعي بالعديد من المميزات والمميزات، ومن هذه المميزات:
- التألق المناعي هو أسلوب من تقنيات التلطيخ المناعي والكيمياء المناعية باستخدام الأجسام المضادة لصبغ البروتينات، وتحديد العلاقة بين الجسم المضاد والمستضد في الأنسجة، واستخدام الفلوروفور لتصور موقع الأجسام المضادة المرتبطة.
- هناك نوعان من التألق المناعي: التألق المناعي المباشر، والذي يستخدم جسمًا مضادًا واحدًا، والتألق المناعي غير المباشر، والذي يستخدم اثنين من الأجسام المضادة الأولية والثانوية المقترنة بالفلورسنت.
- يستخدم التألق المناعي لتقييم معلقات الخلايا، والخلايا المستنبتة، والأنسجة، والخرز، والمصفوفات الدقيقة.
- يتم استخدام التألق المناعي على أقسام الأنسجة، أو الخلايا المستنبتة، أو الخلايا المفردة المثبتة بطرق مختلفة.
- يمكن استخدام الأجسام المضادة في هذه التقنية لتحليل توزيع البروتينات والبروتينات السكرية وأهداف المستضدات الأخرى، بما في ذلك الجزيئات البيولوجية وغير البيولوجية الصغيرة.
- تعتمد تقنية التألق المناعي على طبيعة المستضد، ونوعية وحساسية الجسم المضاد الأولي، وخصائص علامة الفلورسنت، وتقنية النفاذية والتثبيت للعينة، والتصوير الفلوري للخلية، ونوع الخلية، والجسم المضاد و المستضد.
- في هذه التقنية، يتم تعريض صبغة الفلورسنت لضوء قصير الموجة وعالي الطاقة، والذي يتم امتصاصه وينبعث كضوء بأطوال موجية مختلفة. يحتوي الفلورسنت المنبعث على طاقة أقل من الضوء الممتص، وبالتالي فإن الطول الموجي للضوء المنبعث أطول من طول ضوء الإثارة.
- تعتمد تجربة التألق المناعي على ربط أجسام مضادة محددة بالبروتين محل الاهتمام واقتران الأصباغ الفلورية بالمجمعات المناعية لتصور البروتين محل الاهتمام باستخدام الفحص المجهري.
أنواع تكنولوجيا التألق المناعي
هناك نوعان من تكنولوجيا التألق المناعي:
إقرأ أيضا:تعرف علي كلام لطيف قصير 20251. التألق المناعي المباشر
- التألق المناعي المباشر (DIF):إنها تقنية التألق المناعي التي تستخدم جسمًا مضادًا واحدًا، والذي يرتبط كيميائيًا بشكل مباشر بالفلوروبيد أو الفلوروفور.
- كيف تعمل تقنية الفلورسنت المباشر: يتعرف الجسم المضاد الأولي على جزيء المستضد المستهدف ثم يرتبط بمنطقة معينة. يمكن الكشف عن الفلوروفور المرفق بواسطة الفحص المجهري الفلوري وسيتم إصدار طول موجي معين من الضوء بمجرد حدوث الارتباط.
- مزايا التألق المناعي المباشر: وهو أقل شيوعًا، ويقلل عدد الخطوات في إجراء الاقتران المباشر للجسم المضاد بالفلوروفور، ويجعل العملية أسرع، ويقلل من إشارة الخلفية عن طريق تجنب بعض المشكلات المرتبطة بالتفاعل المتبادل للجسم المضاد أو الافتقار إلى الخصوصية.
- مساوئ التألق المناعي المباشر: كن أقل حساسية؛ لأن عدد جزيئات الفلورسنت التي يمكنها الارتباط بالجسم المضاد الأولي محدود، وهو مكلف للغاية، بسبب استخدام العديد من الأجسام المضادة الأولية.
2. التألق المناعي غير المباشر
- التألق المناعي غير المباشر (IIF) التألق المناعي غير المباشر: إنها تقنية التألق المناعي التي تستخدم نوعين من الأجسام المضادة: جسم مضاد أولي وجسم مضاد ثانوي مترافق مع صبغة الفلورسنت.
- آلية عمل التألق المناعي غير المباشر: يتعرف الجسم المضاد الأولي على الجزيء الحيوي المستهدف ويرتبط به، ويتعرف الجسم المضاد الثانوي على الجسم المضاد الأولي ويرتبط به، ثم يتم وضع الهدف بشكل غير مباشر للكشف عنه عبر المجهر.
- مزايا التألق المناعي غير المباشر: هذا النوع أكثر مرونة من حيث التصميم التجريبي، وينتج عنه كشف أكبر للإشارة عن طريق التضخيم، ومن الأسهل الحصول تجاريًا على اتحادات الأجسام المضادة الثانوية، وأقل تكلفة لأنه يمكن استخدام الجسم المضاد الثانوي لأجسام مضادة أولية مختلفة، ويمكن استخدام العديد من البروتينات . بالتوازي، يتم إجراء ما يسمى بالتألق المناعي متعدد الألوان في عينة واحدة، من خلال الجمع بين الأجسام المضادة الأولية المختلفة مع الأجسام المضادة الثانوية المحددة، كل منها يحمل علامة فلوروفور مختلفة.
- مساوئ التألق المناعي غير المباشر: العيب الوحيد لهذا النوع هو عدد الخطوات المتضمنة، وأنه أكثر تعقيدًا من الطريقة المباشرة.
خطوات تقنية التألق المناعي
عادة ما يتم تنفيذ تقنية التألق المناعي في الخطوات التالية:
إقرأ أيضا:تعرف علي نبذة مختصرة عن نفسي بالانجليزي 2025- تحضير الشرائح حسب نوع العينة والمرض الذي نريد الكشف عنه.
- إصلاح العينة عن طريق احتضانها في الميثانول، ثم استخدام بارافورمالدهيد ثم غسله.
- يتم إجراء استرجاع المستضد، وهو خطوة اختيارية، عن طريق تسخين الخلايا في العينة بحيث تعمل الأجسام المضادة بشكل أفضل في خزان استرجاع المستضد.
- خلق نفاذية الخلية في العينات، إذا كان البروتين المستهدف داخل الخلية.
- أداء حجب وتلطيخ أو تلطيخ المناعي.
- يمكن إجراء تلطيخ متعدد الألوان، وهو خطوة اختيارية، للتحقيق في التوزيع المشترك لاثنين أو أكثر من المستضدات المختلفة في نفس العينة، باستخدام إجراء التألق المناعي المزدوج، في وقت واحد في خليط، أو مستضد واحد تلو الآخر بالتتابع.
نتيجة تقنية التألق المناعي
- تظهر نتيجة تقنية التألق المناعي تحت المجهر، حيث تظهر العينة مضيئة بألوان الفلورسنت والفلورسنت بلون ناصع (أخضر أو أزرق أو أحمر)، وذلك بسبب ارتباط الجسم المضاد بالمادة المراد الكشف عنها.
مصدر:
“كتاب “ديفيد بي آربس””دليل التألق المناعي المباشر””المؤلفكتاب “التألق المناعي والببليوغرافيا المشروحة” المؤلف “وارن ر. سانبورن”. “كتاب” التألق المناعي في علم المناعة السريرية “المؤلف” وولف ب. ستورتش“كتاب”علم الأحياء الدقيقة الطبية”المؤلف”ماركيل